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Agrobacterium 화기매개에 의한 형질전환 효율증진

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dud45
등록일
2010-01-05 15:31:27
조회수
3394
작물 형질전환은 특정 작물 내에서의 유전자 기능 분석과 유전자 대량 발현 등에 있어 필수적인 작업이다. 이 작업들은 많은 시간과 노동력을 필요로 하며 T0 세대를 얻더라도 조직 재분화가 충실하지 않다든지 종자가 제대로 열리지 않는 등 많은 문제점을 수반한다. 화기에 목표 유전자를 가지고 있는 Agrobacterium을 접종하여 형질전환체를 선발하는 경우 형질전환체 후보가 T1 종자의 형태로 얻어지기 때문에 재분화나 고정세대에서의 종자수확 문제 등을 피할 수 있으며 세대 진전이 빠르고 조직 배양이 필요하지 않기 때문에 시간과 노동력을 절약할 수 있다. 유채 화기에 형질전환이 가능한지 조사하였다. 애기장대에서와 달리 유채를 포함한 많은 자식성 작물들은 화기가 열리기 전에 수정되며 수정된 주두는 경화되기 때문에 화기가 열리기 전 진공 여압을 통하여 주두에 Agrobacterium을 접종할 수 있는 장치를 고안하여 이용하였다. 접종 후 진공여압 처리를 거치지 않은 유채에서 얻은 종자에서는 형질전환체 후보를 하나도 얻을 수 없었던 반면 710 mmHg에서 5분간 진공여압 처리를 거친 유채에서는 제초제 저항성을 보이는 형질전환체 후보 T0를 1,200립당 2개체 정도의 비율로 얻을 수 있었다. 접종시 이용하는 배지는 형질전환 비율에 큰 영향을 끼치지 않았다. 또한 형질전환체 후보 선발시 환경 조건도 매우 중요하여 하고 현상이 두드러지는 7~8월에는 거의 선발이 불가능하였으며 9월말~10월 초의 환경 조건이 T0 선발에 적합한 것으로 생각된다. 상기의 방법을 고추와 배추에 적용하여 형질전환 가능성을 타진하였다. 형질전환 결과 접종 다음날 고추는 90% 이상의 화기가 낙화하여 거의 형질전환이 되지 않았으며 선발에 필요한 만큼의 종자를 얻을 수 없었다. 배추에서도 형질전환 후 충분한 종자를 얻을 수 없었다. 이는 배추가 타식성 작물이어서 형질전환 후 수정을 시켜야 종자를 얻을 수 있는데 수정이 불충분하게 이루어진 것이 원인인 것으로 생각된다.
작성일:2010-01-05 15:31:27 152.99.82.30

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